我们的研究发现,使用常见的Luria肉汤(磅)中产生相对高背景的重组蛋白表达水平即使没有诱导物(如IPTG)。表达式通常不会增加足够的加法后诱导物。我们得出结论,尽管磅是一个很好的媒介正常大肠杆菌操纵,它不是一个好的媒介镇压蛋白表达在细胞扩张,也不是理想的蛋白表达诱导物时补充道。EB™和OB™旨在克服这些问题。EB™旨在抑制重组蛋白表达水平的调节环腺苷酸(营)和营地受体蛋白(CRP)在细胞扩张,这样的细胞可以扩展没有压力,不受欢迎的外源蛋白质表达和无意的选择突变克隆生长过度原始孕生。当细胞扩张,OB™中添加对蛋白质表达。在这个过程中,不需要进一步的细胞生长和选择新的突变体不再是因为细胞复制在这个阶段是非常有限的。精心制定的组成OB™作品同样通过调节阵营和CRP的水平,但比EB™有相反的效果。因此,不需要添加IPTG T7等强有力的推动者。

增长我们的媒体只包含标准常用原料,盐和碳水化合物。最后组成,单个组件的比率,一直小心翼翼地优化导致上述代谢的影响。

EB™可以取代磅当表达蛋白稳定,不干扰细胞生长。OB™不能更换。

可以使用简化的协议,但只有最稳定和容易表达的蛋白质。您可以简单地从第二步开始。在协议。这将导致强大的蛋白质过度,引入不必要的突变的风险或其他副作用。

的T7启动子太浓时用IPTG诱导。造成的代谢影响OB™也增长强劲。这是一个强大的组合,总是导致过快蛋白表达与负面影响细胞的生存能力。这种情况导致较低的收益率的重组蛋白,可能导致额外的质粒/蛋白质不稳定。