dsDNA Shearase +

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DNA碎片

突出了
  • 最简单的方法生成random-ended dsDNA碎片。
  • 片段大小可以控制通过调节酶的浓度。
  • 片段生成使用dsDNA Shearase +是图书馆建设的理想,下一代测序,甲基化DNA immunopreciptation (MeDIP MeDIP-Seq),等等。
描述

dsDNA Shearase +是一种酶,裂解在DNA产量寡核苷酸磷酸二酯键5 '磷酸和3 '羟基末端。它有一个特别偏爱dsDNA并生成random-ended所需大小的DNA片段在一个单一的步骤。这种酶兼容低容量输入,从而最大限度地减少样品损失。

浓度 1 U /µl
酶失活 热灭活酶在65°C 5分钟。
存储 商店在-20°C长达12个月。避免重复冻结/解冻的试剂。长期存储在≤-70°C。
单位的定义 定义一个单位(1 U)在所需的酶量250 ng人类DNA转化为DNA片段在100 - 500年英国石油公司在20分钟42°C在10µl反应总额。

是的,我们观察到有更多的“T”在第二基地。只有第一和第二基地有点不平衡,但核苷酸分布平衡从第三基地开始。

基因组DNA:酶比率是最关键的一步dsDNA Shearase +反应。有必要规模向上或向下按比例调整DNA输入时的酶量。

  • 5 x反应缓冲区
    • 体积
      • 2µl
      • 4µl
      • 8µl
  • DNA模板
    • 体积
      • 250 ng (xµl)
      • 500 ng (xµl)
      • 1µg (xµl)
  • 水
    • 体积
      • 7µl - xµl
      • 14µl - xµl
      • 28µl - xµl
  • dsDNA Shearase +
    • 体积
      • 1µl
      • 2µl
      • 4µl
  • 总体积
    • 10µl
    • 20µl
    • 40µl
1 U被定义为所需的酶将250 ng人类DNA在20分钟100 - 500个基点(1 U 2µl)。

可以灭活酶孵育5分钟的65°C。DNA清洁& Concentrator-5 (D4003)可以用来清理反应。

是的,请遵循制造商的协议。您还可以使用Select-a-Size DNA清洁&集中器MagBead工具包。

dsDNA Shearase + dsDNA具体,因此,RNA将保持不变如果RNA样品污染。之间的杂交可能发生DNA和RNA的RNA样品污染,减少碎片的性能和效率。我们建议使用RNA-free DNA作为衬底。

甲基化酶活性不受影响。酶检测与人类、老鼠和植物DNA和性能是相同的。

下面是一些可能的原因:•dsDNA Shearase +是特定为ssDNA dsDNA,不有效工作。•酶的性能是影响核糖核酸污染出现在样品检查质量的DNA样本DNA / RNA杂交可能发生在42°C孵化。•确保酶是向上或向下扩展适当的反应。

“我相信我们整个实验室想切换到你shearase结束所有用我们目前做芯片,MeDIP,和MeDIP-seq实验。”

加勒特- K(伯明翰阿拉巴马大学)

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