亚特兰蒂斯dsDNase
E2030
突出了
- 适合用在核小体映射研究。
- 出售单独或作为EZ Nucleosomal DNA的一部分准备工具包(D5220)。
描述
| 浓度 | 0.1 U /µl |
|---|---|
| 失活 | 5 x MN停止缓冲或EDTA |
| 标准的反应时间 | 20分钟 |
| 存储 | 商店在-20°C长达12个月。避免重复冻结/解冻。长时间存储应≤-70°C。 |
| 单位的定义 | 一个单位(U)被定义为所需的酶产生吸光度的增加在每分钟0.001 260海里,使用50毫克/毫升MW DNA高50 mM Na-acetate pH值5.0和5毫米MgCl2 (Kunitz, 1950)。 |
Q1:酶的敏感性不同细胞类型?
一旦分离细胞核,酶的敏感性不同细胞类型之间应该类似。然而,一些细胞系的洗涤剂会更敏感核准备缓冲,从而导致核的丧失。你可以稀释细胞核预科1:1的缓冲区dsDNase消化核前缓冲隔离。
Q2:亚特兰蒂斯dsDNase和MNase之间的区别是什么?
•亚特兰蒂斯dsDNase双链DNA特定核酸内切酶,裂解在DNA产量寡核苷酸磷酸二酯键5 '磷酸和3 '羟基末端。增加孵化时间与亚特兰蒂斯dsDNAse将提高效率,创造更多mono-nucleosomal DNA。
•微球菌的核酸酶(MNase)是一个单和双链DNA和RNA酶。MNase是单链核酸更具体,但乳沟是偏向at富集和AU-rich序列。MNase将导致亚特兰蒂斯dsDNase相比更健壮的消化。增加孵化时间与MNase将增加这种酶的效率并产生更多mono-nucleosomal DNA。
•所需的酶的选择取决于下游应用程序。
Q3:粘性末端片段的5 '和3 '逼近?的相对丰度不同的目的是什么?
亚特兰蒂斯dsDNAse生成random-end,即钝和粘性末端DNA片段,没有特定的悬臂长度。
第四季度:如果nucleosomal DNA是剪切不当和大多数DNA是完好的吗?
洗使胰蛋白酶化细胞颗粒与PBS是非常关键的一步。中残留的EDTA细胞颗粒会减少和亚特兰蒂斯dsDNAse MNase消化效率。其他注意事项不完整的剪切:•检查正确数量的细胞消化。(D5220工具包:1 x106哺乳动物细胞)•如果你只想mono-nucleosomal DNA包含mono -而不是nucleosomal梯,di - tri-nucleosomal,等等,你将需要增加酶的浓度。根据我们的经验,我们需要使用> 1 u /亚特兰蒂斯dsDNAse每百万细胞。